北京基因组所相助建设基于CRISPRi/dCas9的脑内多基因同时抑制系统
近期 ，永利集团米双利研究组与清华大学生命科学学院姚骏研究组相助,建设了动物脑内基于CRISPR interference (CRISPRi)的多重基因条件性敲低平台 ，为在体研究重大卵白复合物的功效和多基因神经疾病的发病机理提供了主要的工具 。该效果于2018年2月在Nature Neuroscience杂志在线揭晓 。
基因特异性的失活战略是基因功效研究的主要要领 ，以CRISPR/Cas9为代表的基因编辑工具已被普遍用于建设转基因细胞株和动物模子 。随着基因功效研究的生长 ，简单基因的敲除/敲低已经缺乏以知足研究者的要求,尤其是关于重大的多卵白复合物和多基因神经疾病 ，多重基因元素失活的条件性组合搭配正日益成为主流需求 。然而 ，逐一构建差别基因的敲除/敲入动物模子再举行杂交 ，受限于低下的制备效率、冗长的制作周期和腾贵的本钱用度 ，已成为研究中的主要瓶颈之一 。另外 ，CRISPR/Cas9切割后爆发的非同源最后毗连修复经常导致非特异性的删除、插入或其它突变 ，导致在单细胞水平爆发多种表型转变 ，例如杂合型、纯合失活型和野生型等 ，可能会对后续实验爆发严重的滋扰 。
在该研究中 ，研究职员使用病毒转达战略 ，针对神经元构建了优化的基于dCas9的CRISPRi系统 ，抵达在小鼠脑内举行高效且靶向特异性的抑制功效基因表达的目的 。该系统能够在神经元的单细胞水平获得均一的表型 ，并且在基因默然能力上显著优于古板的RNAi手艺 。同时 ，使用sgRNA相隔错配的战略 ，在神经元中实现了准确的靶向特异性基因抑制 ，险些不爆发脱靶效应 。
研究职员进一步在动物脑内拓展了该手艺的应用 。使用神经元亚群特异性的启动子 ，条件性控制功效基因Syt1在海马齿状回兴奋性和抑制性神经元中的自力失活 ，实现了对局部神经网络兴奋/抑制平衡的双向调理 。最后 ，研究职员开发了基于一体化载体和双载体的两套CRISPRi多重基因抑制系统 ，划分乐成实现了小鼠脑内syt1及其互作网络卵白共5重基因的同时抑制 ，且能够实现无邪多变的多基因差别组合的高效失活 。
该研究证实 ，针对神经元的CRISPRi能够在动物出生后的各个阶段以及差别心理及病理状态下实现在体操作 ，建设细胞和动物模子 ，剖析多重基因及基因通路与重大表型之间的关系 。该效果为探索重大脑疾病的致病机理 ，追求新型治疗战略 ，提供了无邪而高效的基因编辑工具 。
该研究获得了科技部重点研发专项、国家自然科学基金、永利集团精准基因组医学重点实验室开放课题等基金的资助 。
论文链接
CRISPRi在小鼠脑内举行条件性敲低和多重敲低的设计示意图
